PCR没P出条带 很迷茫提了总RNA之后 然后做了反转录 接着用cDNA p一基因 跑胶时 质粒有但没有p的基因 为什么 做了好几次

来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/05/17 02:37:34
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PCR没P出条带 很迷茫提了总RNA之后 然后做了反转录 接着用cDNA p一基因 跑胶时 质粒有但没有p的基因 为什么 做了好几次
PCR没P出条带 很迷茫
提了总RNA之后 然后做了反转录 接着用cDNA p一基因 跑胶时 质粒有但没有p的基因 为什么 做了好几次

PCR没P出条带 很迷茫提了总RNA之后 然后做了反转录 接着用cDNA p一基因 跑胶时 质粒有但没有p的基因 为什么 做了好几次
情况比较复杂,你得确认1.你的RNA没问题,没有被降解,cDNA合成没问题.可以用该材料的actin引物做PCR检测试试.2你P的基因如果是已知序列,那么设计引物应该很简单,如果是未知的,那么兼并引物没P出东西来是有可能的.若是根据已知序列设计的引物而没有P出产物那就是你PCR体系或者Tm有问题了,试试TOUCHDOWN程序.若是兼并引物,采用touchdown程序,没有P出来的话,要么是引物不行,要么是你的材料取材时间不对,你要扩增的基因没有表达出来.问题比较多,一个一个排除,确保你实验的科学性.祝实验成功.

PCR没P出条带 很迷茫提了总RNA之后 然后做了反转录 接着用cDNA p一基因 跑胶时 质粒有但没有p的基因 为什么 做了好几次 pcr电泳问题我的pcr出现不正常现象,好几次第一次都没p出东西来 之后我又用第一次p出来的产物再p,终于p出了正常的条带.然后我想多p一些保存,之后我还是用第一次p出来的产物再p之后又不太 PCR的时候用普通Taq酶能P出的东西,为什么换了高保真酶之后,同样的循环条件为什么P不出条带? [PCR,RT-PCR,质粒构建,求助]PCR的时候用普通Taq酶能P出的东西,为什么换了高保真酶之后,同样的循环条件为什么P不出条带? 电泳同时点了总DNA和PCR之后的产物以作对比,但总DNA没有条带,PCR产物的电泳条带很亮很清楚,为什么 高保真酶的PCR结果我之前用TAKARA公司的Ex-Tag酶进行PCR,可以P出较好的条带,但用了TAKARA公司的高保真酶Prime STAR GXL DNA polymerase 之后,完全看不到条带,这是为什么呢?实验做的很郁闷呢, 荧光定量PCR引物为什么要跨内含子设计,大家都说是为了避免提RNA时残留基因组的干扰,但是即使跨了内含子,假如有基因组残留,Real time PCR中还是能P出比cDNA大的一条带(含内含子的条带),探 转基因得到了转化苗,做PCR的时候,如果质粒P出了阳性 对照的基因组没有条带 是不是就能确定没转进去基因第一次做的时候,质粒是阳性的,样品有2个在目的片段那也出现了条带,但很暗,后来再 PCR无法P出目的条带最近在做PCR,提取的基因组为模板,基因组序列上从NCBI上找的,没有错.但是无论如何换引物和PCR条件,都会得到一条比目的片段大500bp左右的亮条带.(引物换了很多对儿,卡的 提总RNA RT-PCR 结果可用吗?左边是总RNA,右边是cDNA,现在的问题是,做actin的PCR除了浅浅的目的条带还有大量的 Trizol法提血中的总RNA,跑胶后有的可以显示18S和28带,而有的却什么也没有?为什么呢?曾经用什么条带也没有的RNA样品做RT-PCR后跑胶,结果却有正确的条带显示.是不是与RNA浓度有关呢?同一批血样 土壤细菌总DNA pcr模板量一般多少?小弟新手,最近提取土壤细菌总DNA,pcr一直P不出条带,我感觉多数是模板的问题,请各位大侠们指点一下,一般模板量是多少? PCR电泳,为什么没有条带啊?PCR电泳,第一次跑,一条带都没有.第二次,六条带又有一条没有,这样的情况以前也出现过一次.可以保证到转录出CDNA这一步没有出错,之后操作也没出错.为什么没有了 提取的总RNA跑完电泳条带总是很浅,是提的量少浓度低了还是怎么回事?1%琼脂糖凝胶电泳 tail-pcr的阴性对照出了条带,而加模板的却没出来,怎么回事啊?不知道阴性被什么污染了,出了比较亮的条带,而模板做的tail-pcr却没出来条带,上次做时,都正常,请高手指点一下! 菌液PCR的时候能P出目的条带,为什么测序却完全不正确? 在做PCR实验时为什么总是P不出条带? [菌液PCR,测序,DNA提取,求助]菌液PCR的时候能P出目的条带,为什么测序却完全不正确?