如何从植物中分离叶绿体?详细描述一下所采用的细胞类型及使细胞破碎和和能分离出叶绿体的离心转速!
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/04/29 09:24:38
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如何从植物中分离叶绿体?详细描述一下所采用的细胞类型及使细胞破碎和和能分离出叶绿体的离心转速!
如何从植物中分离叶绿体?
详细描述一下所采用的细胞类型及使细胞破碎和和能分离出叶绿体的离心转速!
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针对盐藻：
取培养7d 的藻细胞培养液4500g 离心10min,细胞沉淀重悬在新鲜的生长培养
基中充分洗涤,然后4500g 离心10min,除去一些细胞外的粘稠物.将离心得到的细胞沉淀重悬在冰预冷的15mL 分离缓冲液( 1mol/ L Sorbitol,50mmol/ L Hepes,2mmol/ L EDTA,1mmol/ L MnCl2,1mmol/ LMgCl2,0.5% BSA,0.1 mol/ L DTT,用KOH 调节到pH 7.5) 中.将15mL 重悬细胞液进行冰浴超声波破碎,超声波功率200W,共作用64s,每次作用时间8s,间隔时间9.9s.然后4℃2000g 离心10min,沉淀重悬在3mL 的分离缓冲液中,作为叶绿体粗提液.将叶绿体粗提液加在蔗糖密度梯度( 30%/ 45%/ 59% ,30mL) 上,4℃40000g 离心30min,吸取45%和59% 之间的条带( 约5mL) ,用3 倍体积的清洗缓冲液( 1 mol/ L Sorbitol,25mmol/ L Hepes,用KOH 调节到pH 7.5) 清洗收集物,4℃2000g 离心10min,沉淀即为完整的叶绿体.
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