蛋白质组学的研究手段有哪些?原来这里已经有回答了,希望详尽点.
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/05/11 02:34:31
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一 双向电泳.双向电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)与质谱(mass spectrum,MS)的结合是最常见的蛋白质组学的研究手段.双向电泳包括第一向等电聚焦(Isoelectric focusing,IEF)和第二向SDS-PAGE(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis).双向电泳可以提供包含有分子量和等电点信息的二维图谱
二 多维色谱法.在多维色谱法中,蛋白样品通常先被消化成肽段,然后经过离子交换、反相HPLC(high-performance liquid chromatography)而被分离.该方法的中HPLC可以直接和质谱偶联,可有效的分析极酸或极碱、高度疏水等传统2-DE方法难以分析的蛋白质,而且易于实现分析的自动化.
三 荧光差异凝胶电泳技术(differential in-gel electrophoresis,DIGE).DIGE可用三种不同的荧光染料来分别对样品进行标记,荧光染料可以通过酰胺键与蛋白质的赖氨酸ε-氨基共价结合.将标记的样品混合然后在同一块双向电泳凝胶上分离.这样在一块双向电泳凝胶上可获得三幅图像,即在一块凝胶内分析不同的蛋白样品.DIGE有效地改善了传统2-DE的重复性.
四 定量蛋白质组学方法：
⑴ ICAT(isotope-coded affinity tags)方法.ICAT是用于定量蛋白质组学研究的稳定同位素标签法的一种.在稳定同位素标签法中,质谱可以通过识别标记的肽段和未标记的肽段之间的信号强度差异来达到定量的目的.在ICAT方法中,带有生物素半分子的同位素标签对样品中蛋白质的半胱氨酸残基进行标记,标记的蛋白样品经过消化成为肽段后,经阳离子交换色谱和亲和素亲和纯化,然后进入质谱鉴定.相同肽段在质谱上会表现为双峰,峰的强度直接反应了该肽段对应的蛋白质在两种样品中的相对强度.ICAT的缺点是无法标记缺乏半胱氨酸残基的蛋白质、会丢失转录后修饰信息、相同肽段由于标记上的差异在HPLC中会产生不一致的洗脱表现以及增加的生物素基团会增加质谱解析的复杂性[47][48].
⑵ cICAT (cleavable isotope-coded affinity tags).也是稳定同位素标签法,基于ICAT.cICAT采用了13C和酸性可裂解生物素而克服了ICAT的部分缺点.
⑶ iTRAQ .iTRAQ(isobaric tags for relative and absolute quantitation)法可同时分析多达四个不同样品的,该方法不会丢失转录后修饰信息,因而可以用于信号转导中的蛋白质磷酸化修饰的研究.