苯酚：氯仿：异戊醇为什么要25:24:比例不一样会有什么影响?配得不准会影响DNA的提取吗?
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/05/03 15:51:46
苯酚：氯仿：异戊醇为什么要25:24:比例不一样会有什么影响?配得不准会影响DNA的提取吗?
苯酚：氯仿：异戊醇为什么要25:24:
比例不一样会有什么影响?配得不准会影响DNA的提取吗?
苯酚：氯仿：异戊醇为什么要25:24:比例不一样会有什么影响?配得不准会影响DNA的提取吗?
楼主：这是我收藏的别人的实验心得,你看一下,希望对你有帮助.
抽提DNA去除蛋白质时,怎样使用酚与氯仿较好?酚与氯仿是非极性分子,水是极性分子,当蛋白水溶液与酚或氯仿混合时,蛋白质分子之间的水分子就被酚或氯仿挤去,使蛋白失去水合状态而变性.经过离心,变性蛋白质的密度比水的密度为大,因而与水相分离,沉淀在水相下面,从而与溶解在水相中的DNA分开.而酚与氯仿有机溶剂比重更大,保留在最下层.作为表面变性的酚与氯仿,在去除蛋白质的作用中,各有利弊,酚的变性作用大,但酚与水相有一定程度的互溶,大约10％～15％的水溶解在酚相中,因而损失了这部分水相中的DNA,而氯仿的变性作用不如酚效果好,但氯仿与水不相混溶,不会带走DNA.所以在抽提过程中,混合使用酚与氯仿效果最好.经酚第一次抽提后的水相中有残留的酚,由于酚与氯仿是互溶的,可用氯仿第二次变性蛋白质,此时一起将酚带走.也可以在第二次抽提时,将酚与氯仿混合（1:1）使用.
为什么用酚与氯仿抽提DNA时,还要加少量的异戊酵?在抽提DNA时,为了混合均匀,必须剧烈振荡容器数次,这时在混合液内易产生气泡,气泡会阻止相互间的充分作用.加入异戊醇能降低分子表面张力,所以能减少抽提过程中的泡沫产生.一般采用氯仿与异戊酵为24：1之比.也可采用酚、氯仿与异戊醇之比为25：24:1（不必先配制,可在临用前把一份酚加一份24：1的氯仿与异戊醇即成）,同时异戊醇有助于分相,使离心后的上层水相,中层变性蛋白相以及下层有机溶剂相维持稳定.