如何测试细胞中的自由基 比如H2O2、OH*、O2*

来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/05/10 20:23:20
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如何测试细胞中的自由基 比如H2O2、OH*、O2*
以植物材料为例
O2-产生速率的测定
称取新鲜叶片 0.5g,用5 ml 50 mM 磷酸缓冲液（pH为7.8）研磨,滤液在6600xg离心20 min.
取上清液1 ml 加入磷酸缓冲液0.9 ml和10 mM盐酸羟胺0.1 ml,在25℃下混和培养20 min.取1 ml培养液依次加入1 ml 17 mM对氨基苯磺酸和1 ml 7 mM α-萘胺,25℃反应20 min,显色液充分混匀,静止分层,取下层液测OD530.
H2O2含量测定
称取新鲜叶片1 g,加入 10 ml 冷丙酮及少量石英砂在冰浴下研磨,2200 xg离心10 min.取1 ml 上清液,加0.1 ml 5％ Ti（SO4）2 溶液,0.2 ml 氨水,待沉淀后2200xg离心10 min,弃去上清,沉淀用丙酮悬浮洗涤3次,最后将沉淀溶于5 ml 2 M 的H2SO4中,测OD415.
对照标准曲线算出材料中过氧化氢的含量

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